Оценка жизнеспособности, подсчёт и идентификация клеток

После проведения сепарации (выделения) необходимо определить в каком состоянии и какое количество клеток удалось собрать.

Подсчёт количества жизнеспособных клеток производят чаще всего микроскопическим способом, используя специальные микроскопические слайды (например, камеру Горяева). Определение жизнеспособности может проводиться различными методами. Наиболее простым является добавление специальных красителей, которые проникают внутрь клетки только при повреждении её мембраны. Таким образом, окрашенные клетки признаются не жизнеспособными. Естественно, краситель добавляется не в весь полученный материал, а только в его образец с последующим расчётом уровня жизнеспособности всех собранных клеток. Хорошим результатом сепарации первичного биологического материала является жизнеспособность в первичной культуре более 70-80%, а при дальнейшем культивировании – более 90%.

Более сложные и точные методики оценки жизнеспособности сводятся к определению возможности клеток осуществлять свои функции. Для этого в первичной культуре вычисляют уровень содержания специфических веществ, которые вырабатываются клетками в нормальном состоянии. Снижение концентрации этих веществ указывает на то, что внешне неповреждённая клетка может оказаться функционально неполноценной, то есть не пригодной для дальнейшего использования.

Ещё одним важным аспектом является идентификация полученных клеток, то есть определение какие конкретно клетки получены. Для этого используют специальные реактивы (моноклональные антитела со специальными флуоресцентными метками), которые могут связываться только с определёнными типами клеток. Для осуществления идентификации в нашем центре используют проточный лазерный цитофлюориметр фирмы Becton Dickinson.

Галерея